標(biāo)題：酶或麥芽糖結(jié)合層析生物實(shí)驗(yàn)圖像顯微鏡
信息分類:站內(nèi)新聞
作者:yiyi發(fā)布
時(shí)間:2016-10-2 22:22:33
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正文:
親和層析
一些蛋白質(zhì)的一個(gè)重要的特點(diǎn)是不通過共價(jià)作用就可以與配體緊密
連接。這個(gè)性質(zhì)被用于純化，基本原理是配體通過共價(jià)作用連接到基質(zhì)
上。當(dāng)流動(dòng)相流過柱子時(shí)，與配體有強(qiáng)親和力的蛋白質(zhì)結(jié)合到配體上，
它們流過柱子的速度減慢，與配體無親和力的蛋白質(zhì)直接流過柱子。這
種方法為純化提供了一種獨(dú)特的選擇途徑。親和層析有一個(gè)很大的優(yōu)點(diǎn)
就是利用了蛋白質(zhì)的生物化學(xué)性質(zhì)而不是蛋白質(zhì)的物理性質(zhì)。
親和層析依賴于蛋白質(zhì)與不移動(dòng)的配體之間的相互作用。結(jié)合必需
足夠特異以區(qū)分不同的蛋白質(zhì)，但如果結(jié)合非常緊密(大的親和力)，從
柱子上洗脫蛋白質(zhì)也是一個(gè)問題。主要的洗脫方法是競爭蛋白質(zhì)的結(jié)合
位點(diǎn)。因此，常用的洗脫方法是加入外來的或自由的配體與共價(jià)連接的
配體競爭與蛋白質(zhì)的結(jié)合位點(diǎn)。第二種方法是改變?nèi)芤涵h(huán)境到足夠阻礙
蛋白質(zhì)與配體之間的結(jié)合。在這些條件下，蛋白質(zhì)不再表現(xiàn)與配體間很
強(qiáng)的親和力從而被洗脫。后一個(gè)方法中不能用可以使蛋白質(zhì)變性的溶液
環(huán)境，一般只是適當(dāng)?shù)馗淖內(nèi)芤旱膒H與離子強(qiáng)度。酶很適合于這種層析
方法，協(xié)同因子如NAD、NADP和ADP無疑被用作親和層析中的配體。
親和層析的一個(gè)限制因素是必須有辦法把配體共價(jià)連接到基質(zhì)上。
這一共價(jià)修飾又不能破壞它與蛋白質(zhì)之間的親和力，還必須在層析過程
中使用中性的溫度、pH以及溶液環(huán)境下使之能夠穩(wěn)定存在而不被破壞。
最近，有大量的基于親和層析的分離方法出現(xiàn)，因?yàn)楸磉_(dá)系統(tǒng)的發(fā)展可
以產(chǎn)生帶組氨酸標(biāo)簽的蛋白質(zhì)以及融合到其他蛋白質(zhì)如谷胱苷肽S轉(zhuǎn)移
酶或麥芽糖結(jié)合蛋白的蛋白質(zhì)。組氨酸標(biāo)簽可以加到蛋白質(zhì)N端或C端并
結(jié)合到金屬螯合的含有亞乙酸配體的柱子上。同樣，谷胱苷肽S轉(zhuǎn)移酶
可以結(jié)合到谷胱苷肽配體上，谷胱苷肽配體可以共價(jià)結(jié)合到瓊脂糖凝膠
上。
出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科
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