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正文:
一、微生物分離技術
(一)Streak(or spread)Plates劃碟法
將接種環(huán)燒紅滅菌,待冷卻再取細菌樣品,依同方向一劃線(將培養(yǎng)皿微開),此具有稀釋作用,使每區(qū)菌數漸稀,菌落能分開而單獨產生,劃定后放入保溫箱中培養(yǎng),37℃,24hr。
(二)Poured plates倒碟法(注入法)
以稀釋水稀釋菌種水樣3~4次,取出1ml,置于已滅菌(121℃,15psi,15min)之培養(yǎng)皿中央,再倒入培養(yǎng)基(液),搖動混合均勻,培養(yǎng)后取出計數,即知1ml內之細菌數。(稀釋水含MgSO4.7H2O、KH2PO4緩衝液)。
二、鑒定(Identification)
(一)顯微鏡觀察
菌體外形、大小、排列、運動性、染色、顏色、透明度,孢子染色、莢膜染色、鞭毛個數,添加酸性酒精是否變色。
(二)生化特性
1.碳源之利用:如乳糖之利用,產生酸使pH值降低,產生H2O、CO2,淀粉(I2-KI)。
2.氮源之利用:如胺基酸利用產生H2S,NH3
3.硝酸鹽之作用:NO3-→NO2-→HN4+
4.酵素之作用:尿素分解NH3、CO2
例如IMViC test為大腸桿菌及產氣桿菌之鑒別試驗
(1)I: Indole test
細胞色素氧化脢 Cytochrome Oxidase
Tryptephane(含pepton)→indole
經培養(yǎng)如有indole代謝中間產物存在遇了醚會呈紅色,結果E.coli呈陽性反應(紅色),而產氣桿菌呈陰性反應。
(2)M: Methyl red test(測試pH值)
E.coli培養(yǎng)液中產生酸使pH<4.5,則呈紅色反應為陽性產氣桿菌培養(yǎng)液不產生酸則pH>4.5,呈黃色反應為陰性
(3)Vi: Voges-Prokauer reaction
此反應在測試葡萄糖經分解后是否產生acetylmentyl carbinol代謝產物,此代謝產物與培養(yǎng)液中之冗酸作用,會產生紅色化合物。大腸桿菌不呈紅色,產氣桿菌呈紅色
(4)C: citrate test
產生桿菌可利用檸檬酸(Citrate)作為唯一碳源而生長,而E.coli則否。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京顯微鏡百科