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正文:

魚類病毒的分離：

A.病材準(zhǔn)備：
1.以無(wú)菌操作摘取疑似感染的器官，將它切碎。
2.加入少量含有抗生素(penicillin 1000 unit/ml 與 streptomycin 1,000μg/ml)
及 0.5%(W/V)牛白蛋白之磷酸緩沖液(PBS, pH7.2 )，以研缽將其磨碎均質(zhì)化，
做成 10 倍乳劑，保存于-20℃。
3.使用前將此均質(zhì)液以 3,000g 離心 10 分鐘，回收上清液，用做后續(xù)的檢驗(yàn)。
B.細(xì)胞培養(yǎng)分離法：
1.取 4 支長(zhǎng)滿無(wú)特定病原魚(SPF)來(lái)源之魚類細(xì)胞 25cm2 組織培養(yǎng)瓶，各接種
0.5ml 樣品，在 24℃吸附 30 分鐘。
2.以 PBS 衡鹽液洗 2 次。
3.加入細(xì)胞維持液，放 24℃恆溫箱培養(yǎng)。
4.每日于倒立光學(xué)顯微鏡下觀察是否有細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathic effect ,CPE)，若有則會(huì)出現(xiàn)圓形折射性細(xì)胞，或細(xì)胞碎裂。
5.觀察 6 天后仍沒(méi)有 CPE，則將它冷凍解凍后溶液接種新的細(xì)胞，此步驟可能需
要重複至少 3 次。
6.若發(fā)現(xiàn) CPE，則病毒應(yīng)以抗血清進(jìn)行中和試驗(yàn) (virus neutralization ,VN)

出自http://www.bjsgyq.com/北京顯微鏡百科