信息分類:站內新聞
作者:yiyi發(fā)布
時間:2012-1-15 14:33:53
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正文:
材 料:
液態(tài)氮
Digestion buffer
[配方]100mM NaCl 10mM Tris.Cl,pH8
25mM EDTA, pH8 0.5﹪sodium dodecyl sulfate
※ 0.1mglml proteinase K(proteinase K必須在每次使用前才加入以保有效)
4℃ Phosphate-buffered saline (PBS)
[配方]10X儲存液:
每公升中含--80g NaCl 2g KCl
11.5g Na2HPO4.7H2O 2g KH2PO4
使用液(工作液):
pH7.3--137mM NaCl 2.7mM KCl
4.3mM Na2HPO4.7H2O 1.4mM KH2PO4
25:24:1 Phenol/Chloroform/isoamyl alcohol
7.5M ammonium acetate
100﹪及70﹪ethanol
TE brffer pH8
方 法:
1. 將動物組織切下, 迅速放入液態(tài)氮中, 待組織凍硬, 立即磨成粉狀.
2. 每100mg組織加入1.2ml digestion buffer. (若係用組織培養(yǎng)細胞, 則離心1000rpm, 5min, 沉淀細胞, 再以PBS洗細胞二次, 離心除去PBS, 再將細胞溶在digestion buffer中, buffer的用量為每108細胞用1ml).
3. 將組織或細胞放在digestion buffer中, 在50℃, 振盪12hr.
4. 以等體積的Phenol/Chloroform/isoamyl alcohol提取DNA.
5. 離心2,500rpm, 10min, 上清液中為DNA. (若中間層的白色物質量多, 可重複此提純程序)
6. 將上清一轉至另一離心管中, 加入1/2倍體積量之7.5M ammonium acetate, 及上清液量2倍之100﹪ethanol, DNA當很快析出. 再以離心2,500rpm, 2min, 沉淀DNA, 倒去上清.
7. 用70﹪ethanol洗DNA, 以去除鹽分及phenol, 倒去酒精, 使DNA乾燥.
8. 將DNA溶入適量TE中, 可將離心管放65℃并緩緩振盪, 以加速溶解.
9. 將DNA保存在-20℃(以1mg/ml為佳).
預期結果:每克動物組織或每109個細胞約可得2mg DNA.
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