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鑒定的特定基因膜結(jié)構(gòu)域的特征分析
顯微鏡
復(fù)合子結(jié)合,以及跨膜結(jié)構(gòu)域的特征。例如,如果通過預(yù)測某蛋白
結(jié)合了一個類似亞鐵血紅素這樣的氧化還原活性復(fù)合子,我們就可以推
測它在電子轉(zhuǎn)移中會發(fā)揮作用。要謹記的是數(shù)據(jù)庫預(yù)測只是推測,還要
通過實驗確認;然而這些程序?qū)︻A(yù)測的準確驗證仍有很大的幫助。
一旦證實通過突變鑒定的特定基因參與了目的代謝過程,許多探索
試驗都成為可行。依靠相似的表現(xiàn)型鑒定的各種突變后,可以在分子水
平上構(gòu)建工作模型?梢詮拇_定基因如何催化目標和環(huán)境相關(guān)因素如何
調(diào)節(jié)開始研究。假設(shè)這個代謝過程的基因已被確定,可由此設(shè)計分子工
具(PCR探針,抗體)來監(jiān)視給定環(huán)境中該進程是否發(fā)生。一旦某基因的
操縱元件(例如啟動子)被確定后,就可以設(shè)計工程菌來表達該基因。例
如,一個目的基因的啟動子克隆到質(zhì)粒中并啟動一個能被
熒光或比色檢
測的蛋白表達(gfp的表達,它編碼綠色熒光蛋白[GFP];或lacZ編碼B半
乳糖苷酶)。在實驗室中通過調(diào)控各種環(huán)境因素結(jié)合熒光定量或B半乳糖
苷酶活性來準確考察目標基因的表達情況。
而基因融合則能同時檢測轉(zhuǎn)錄和翻譯。后者的報告基因與編碼目的
蛋白的基因融合,因此當它表達時,其帶有的報道標簽也得以表達。根
據(jù)標簽的種類,能夠直接在活細胞中檢測到翻譯的融合產(chǎn)物
最后,基因產(chǎn)物的生化性質(zhì)研究可以在野生菌中或在其他能夠超量
表達該基因的克隆菌株中進行。許多重要的機理問題可以在該研究階段
得以回答。例如,一旦蛋白純化的方法得到發(fā)展,就可以通過研究晶體
結(jié)構(gòu)來確定細胞中其他相關(guān)蛋白的性質(zhì)。
出自http://www.bjsgyq.com/
北京顯微鏡百科
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